[미생물 실험] 세균을 위한, 세균에 의한, 세균의 '배지' 만들기

[@somiji7758]

미생물시험이나 무균시험할때 실험실 요건이 멸균된 청절실에서 굳이 하지않아도 괜찮나요? 현재 일반실험실에서 진행하고자 준비중입니다. 또한 잘 다뤄야겠지만 실험중 균들이 실험자나 다른 대상에 옮겨갈 가능성은 고려하지 않아도 될까요?

[@ThisIsGraduateStudent]

실험 종류에 따라 무균실에서 해야할지, 그냥 일반 연구실에서 해도 되는지가 결정 됩니다. 어떤 실험을 하실 예정이신가요? 😄 알려주시면 상세히 말씀 드릴게요. 소독만 잘 하면 다른 대상에 옮겨갈 가능성은 희박합니다. 무균술기를 한번 검색해보시면 도움 되실거에요!

[@somiji7758]

@@ThisIsGraduateStudent 답글 감사합니다 ㅎㅎ 멸균의료기기 제조하는 회사인데 멸균공정 후 무균시험을 자체내부적으로 진행하려고해요. 공식적으로 코라스인증받은 기관에서 진행해왔었지만 자체적으로 제품 개발할때 간단하게 무균여부를 확인하고 싶은데, 매번 시험기관에 맡기기 비용이 부담스럽더라구요. 무균시험용 클린벤치 따로 준비하고 집기류들 전부 멸균사용해서 사용할 예정이고 배양기로 균도 직접 배지에 키워서 진행할건데 꼭 청정실에서 다뤄야하는건지 궁금했습니다 ㅎㅎ

[@ThisIsGraduateStudent]

@@somiji7758 아, 설명해주신 수준의 멸균 시험을 위해서는 클린 벤치 BSC level 2 정도에서 가능할 듯 합니다! 다만, 기준과 실험 수준이 높아야 합니다. 균이 1마리 밖에 없다면, 배양 시험 등에서 균이 검출되지 않아 통과하겠지만 어쨌든 균이 있긴 한거니까요.

[@ThisIsGraduateStudent]

@@somiji7758 그리고, 진균, 바이러스 등 고려해야할 요소가 좀 많긴 하네요 ㅠㅠ 에어샤워룸이 설치된 청정실이면 물론 좋겠지만, 무균 여부를 확인하는 건 어렵긴 해도 가능은 하다 생각됩니다. 무균 시험에서 검출 기준으로 잡으신 세균이나 진균이 있으신가요??

[@somiji7758]

@@ThisIsGraduateStudent 대한약전에 있는 무균시험법 그대로 준수하려고 합니다~! 의료기기 무균시험은 기준을 까다롭게 잡을수밖에 없어서요! 다만 실험실 요건이 꼭 청정이어야하는지 궁금했어요. 반드시 청정이어야한다면.. 제품만드는 청정실이나 연구소에 청정실을 따로 만들어어하니 일이 커지는 느낌이더라구요 ㅎㅎ.. 액상배지 대두카제인배지 두개에서 각각 해당하는 균주 총 6종 모두 다룰예정입니다.

[@Chemical-o9c]

증류수와 재료를 한번에 섞는걸 지양하는 이유가 무엇인가요?

[@ThisIsGraduateStudent]

가루 형태의 시약을 물에 섞을 때, 한번에 물에 넣을 경우 가루 뭉침이 매우 심해 섞기가 거의 불가능해집니다. 이런 실험용 시약들은 대부분 가루가 매우 고운 입자라서 특히 가루 뭉침이 심한 편입니다. 물에 미숫가루나 우유에 제티를 섞는 상황을 상상해보시면 좋을 것 같아요! 그리고 그렇게 뭉친 가루를 풀어주지 않고 멸균을 할 경우, 뭉친 가루의 중심 부분은 멸균이 제대로 되지 않을수가 있어서 꼭 풀어줘야 합니다. 이건 논외이지만, 일부 액체 또는 고체 형태의 시약은 물과 섞을 때 폭발하거나 발열을 일으키는 경우가 있어서 천천히 나눠서 섞어주기도 합니다. 😊

[@Chemical-o9c]

@@ThisIsGraduateStudent 빠른답변 감사합니다!!!

[@ThisIsGraduateStudent]

@@Chemical-o9c 좋은 하루 보내세요 ㅎㅎ 🙆

[@원주율-t4m]

학부연구생인데 많이 배우고 강 감사해요 이 댓글을 보는 시점에서 졸업은 하셨나요

[@ThisIsGraduateStudent]

감사합니다 ㅎㅎ 석사 2년 끝내고 같은 연구실에서 박사 1년째 하고 있습니다 😄

[@박-e2t]

안녕하세요. 궁금한 게 있는데 고체배지 제조시 기포가 생기지 않도록 주의해야 하잖아요! 그게 정확한 분별을 위해서 그런걸까요? 만일 정성시험으로 균의 유무만 판별하려 한다면 고체배지 제조 시 생긴 기포는 실험에 큰 영향을 주지 않는거겠죠?

[@ThisIsGraduateStudent]

네네 맞습니다. 단순히 균의 유무만 판단하실 때에는 기포가 없는 쪽의 콜로니로 확인하셔도 됩니다. 기포가 생기면 안 되는 과정은 총 2가지 입니다. 1번째는 처음 가루와 물을 섞어줄 때입니다. 이 때 기포가 발생한다는 것은 너무 세게 섞어서 배지속 단백질이 파괴되는 바람에, 이 파괴된 단백질이 기포형태로 나타나는 것이죠. 기포가 적을수록 배지의 단백질이 온전하다고 보시면 됩니다. 2번째는 배지에 분주할 때인데, 이때 기포가 발생한채로 굳게 되면 콜로니 모양 또는 크기가 틀어질 수도 있고, 파인 부분을 백금이가 지나가면서 세균이 튀거나 성분 조각이 이리저리 굴러다닐 수 있죠. 또 커다란 기포가 생겨 뚜껑에 닫게 된다면 컨탐을 일으킬 수도 있구요. 매우 자잘하게 테두리쪽에 생긴 기포라면 어느 정도 무시하셔도 괜찮습니다. 😊

[@박-e2t]

감사합니다😊

[@architect9872]

플레이트 안에 습기는 왜 제거해야하나요?

[@ThisIsGraduateStudent]

평상시 배양할때처럼 플레이트를 뒤집어 배양할 때가 있고, 간혹 플레이트를 뒤집지 않고 배양할 때가 있습니다. 두 경우를 모두 생각해봅시다! 플레이트를 뒤집어 배양할 경우, 습기가 모여 만들어진 물방울들이 뚜껑과 플레이트가 만나는 부분으로 퍼져서 외부 공기로부터 컨탐을 유발하고, 공기가 통하는 구멍을 막아버리게 됩니다. 플레이트를 뒤집지 않고 배양할 경우 플레이트 안의 습기가 모이면 물방울이 되어 집락 위로 떨어지게 됩니다. 그러면 마치 Proteus 세균을 키운것처럼 쫙쫙 퍼져버리게 되는데, 단일 집락을 절대 얻을 수 없죠 ㅠㅠ 약간의 습기는 어느 정도 있어도 무방하지만, 많은 습기는 배양 단계와 보관 단계에서 문제를 일으킵니다. 습기는 37도 인큐베이터에서 하루 정도 제거 후에 써주시는게 좋습니다. :)

[@architect9872]

@@ThisIsGraduateStudent 우와 정말 친절한 답변 감사합니다!!

[@ThisIsGraduateStudent]

@@architect9872 제가 지금 일본에 있어서 답변이 좀 느렸네요 ㅠㅠ 좋은 하루 보내세요!

[@user-hj2gm7jv8o]

안녕하세요! 혹시 이 영상 제작하실 때 참고하신 논문이나 책 있을까요....? 보고서를 써야하는데 출처를 적어야해서요ㅠㅠ

[@ThisIsGraduateStudent]

음, 영상 속에 있는 내용들은 제가 책을 참고해서 만든 것도 있고, 미생물 전공 교수님 또는 선배님들 말씀, 회사에서 제공하는 데이터시트, 제 개인적 경험, 저희 교수님의 가르침 등등 여러가지가 혼재되어 있어서 정확한 출처를 말씀 드리긴 어렵습니다만, 굳이 하나를 꼽는다면 미생물 교과서(고려의학, 임상미생물학)라고 말씀 드려야겠네요 ㅠㅠ 레퍼런스가 다량으로 필요하시다면, 교과서, 원서에 나와있는 참고 문헌을 이용하시면 좋을듯 합니다!

[@김태환-d3h]

안녕하세요!! 궁금한 점이 하나 있어 여쭤보고 싶습니다!! 다름이 아니라 생물학 실험에서 증류수같은 용매를 사용해서 용질들을 용액으로 만드는 이유가 대부분의 생물반응은 수용액 상에서 일어나기 때문인가요? 일으키고자 하는 반응에 적합한 환경을 만들어주기 위해 증류수를 사용하는건가요?!

[@ThisIsGraduateStudent]

기본적인 용매를 액체 상태의 물을 사용하는 것은 물의 특성 때문입니다! 1. 물은 극성을 가진다. 물은 수소와 산소가 옥텟 규칙으로 완전히 공유결합되어 잇고, 물 분자들끼리 +, -극으로 서로 끌어당기고 있기 때문에, 다른 물질과 섞이기 쉽습니다. 그래서 다른 물질을 넣기에 적합하죠. 2. 물은 비열이 크다. 비열이 크다는 말은 외부 온도에 의해 쉽게 변하지 않는다는 뜻입니다. 고체에 비해 온도가 천천히 올라가고 천천히 떨어지기 때문에, 안에 있는 물질이 보호되기 쉽죠. 3. 액체 상태의 물은 움직임이 있다. 물은 외부에서 진동, 충격, 힘이 가해지면 안에서 움직입니다. 움직이게 되면 안에 있는 물질들은 섞이겠죠. 물질들은 서로 섞이면서 부딪히고 마주치면서 여러 화학반응이 일어날수 있습니다. 마주치지 않으면 화학반응이 일어나지 않기 때문에 액체 속에서 움직이는 활동은 매우 중요하죠. 말씀하신 것처럼 대부분의 생물반응이 수용액 내에서 일어날 수 있었던 이유는 위와 같습니다. 또한 증류수는 안에 미네랄 같은 물질이 없는 순수한 물이기 때문에, 세균과 진균이 번식하기 힘든 환경입니다. 시약을 오래 보관하기에도 좋죠. 그리고 시약이 액체 상태라면 보관, 수송, 제조하기에 편하기 때문에 너무나 많은 장점을 가지고 있습니다. 제가 말씀 드린 여러 이유들 외에도 많은 이유가 있지만 여기까지만 적겠습니다. 😊 물에 녹지 않는 물질은 물을 대체해서 기름과 같은 유기용매에 녹이는 경우도 많습니다. 😄 혹시 더 궁금하신 사항이 있으시면 언제든 댓글 남겨주세요. 감사합니다. 🙇🙋

[@김태환-d3h]

@@ThisIsGraduateStudent 정말 감사합니다!!!!

[@김태환-d3h]

@@ThisIsGraduateStudent 죄송하지만 또 궁금한 것이 있는데요 혹시 이런 종류의 지식은 어떻게 습득하셨나요?? 제가 문과 출신으로 생명과학을 전공하게 돼서 기초적인 지식이 부족해 이런 지식을 습득할 수 있는 책을 보고 싶습니다 ㅜㅜ

[@ThisIsGraduateStudent]

@@김태환-d3h 저는 석사 생활하고, 박사로 오면서 이것저것 수업도 듣고, 논문도 찾아보고 이러다 보니 얻게 되었는데, 요즘은 책 보다는 인터넷을 추천드립니다. 책이나 교과서의 집필 기간은 2~3년이므로, 만들어지는 중에도 많은 사실들이 바뀌는 등 시대에 좀 뒤쳐진? 그런 느낌이 많이 듭니다. 좀 정리하는 느낌을 받고 싶으시다면, 고등학생 수능특강, 수능완성 생명과학1, 2만 정독하셔도 꽤 많은걸 알 수 있습니다. 사실 대학 학부 과정은 생명과학 1, 2의 내용을 바탕으로 약간 연장선을 더한 것 뿐이고, 대학원 과정은 또 그걸 바탕으로 새로운걸 증명하는 단계일 뿐이거든요. 저는 가끔 기억이 안나는 부분은 고등학교 책을 찾아본답니다 ㅋㅋㅋ. 또 지식을 빠르게 얻는 방법은 과학 유튜버들 영상 찾아보는것도 한몫하는 것 같아요. 영상에서 어떤 얘기가 나오면, 인터넷이나 논문 찾아서 사실인지 팩트 체크해보고, 그대로 머리에 흡수하는 거죠. 이게 반복되다 보면 정말 빨라진답니다! 혹시 또 궁금한 건 없으실까요?? 😄

[@김태환-d3h]

@@ThisIsGraduateStudent 정말 감사합니다ㅜㅜㅜ 도움이 많이 됐습니다 좋은 하루 보내세요!!!

[@minryoungkim]

와 꿀팁 감사합니다~~~~~

[@ThisIsGraduateStudent]

감사합니다 😊🙇🙇

[@Minyyy__]

질문 있습니다! PCA Agar를 칭량 후 증류수 넣고 가열하면 pca 배지가 나오는데 PCA + btb용액을 넣고 초록색 배지가 나올려면 btb용액을 가열하기 전에 넣어야 하나요 후에 넣어야 하나요..?? 혹시 아시나요..?

[@ThisIsGraduateStudent]

제가 어제 너무 피곤하다보니 일찍 잠들어서 이제서야 답변해드리네요 ㅠㅠㅠ 죄송합니다. BTB 같은 pH 지시약들이 보통 배지 가루에 같이 첨가가 많이 되다보니 온도에 별 문제가 없는 것으로 생각되는데, 기화된 BTB 기체가 좀 위험하다고 알고 있어서 autoclave 후 괜찮을지 모르겠습니다 ㅠㅠ. 넣고 autoclave를 돌린 것과 autoclave 후 식혀서 넣은 것, 이 2개의 성능 비교는 한번쯤은 꼭 필요하리라 생각됩니다. 제 개인적인 의견은 BTB가 열에 민감한 단백질이 아니다 보니 괜찮을거 같다는 생각입니다.

[@뉴뉴-l7z]

안녕하세요 일반세균 시험할 때 희석액으로 멸균생리식염수나 멸균인산완충용액이라는 걸 쓴다고 알고 있는데요. 혹시 BPW란느 것을 사용하기도 하나요?.. 아님 저 용어 중 같은 것이 있는걸까요 ?ㅠㅠ

[@ThisIsGraduateStudent]

BPW 라면 Buffered peptone water를 말씀하시는 건가요? 이거는 제가 알기로 monophotassium, disodium으로 phosphate 버퍼링(pH)을 맞추고, peptone으로 영양분, NaCl로 삼투압을 맞춘 액체 배지로 알고 있어요. 물론 일반적인 균을 푸는 희석용으로 사용해도 상관은 없겠지만, BPW는 펩톤을 좋아하는 살모넬라, E. coli 균류의 배양용으로 사용하는게 좀 더 목적에 맞는것 같습니다. BPW는 값비싼 액체 배지지만, 단순 희석용으로 쓰기에는 아무래도 PBS(멸균인산완충용액) 또는 saline(멸균생리식염수)가 훨씬 싸다고 생각됩니다. 가격이 아무리 낮다 그래도 D.W.를 사용하시면 안됩니다! D.W.는 증류수, 말 그대로 이온이나 결정이 없기 때문에 삼투압에 의해서 세균이 많이 터져 죽을 가능성이 높아요. ㅠㅠ 여기까지가 제 짧디짧은 개인적 견해입니다. 다른 궁금한 점 있으시면 언제든 물어봐주세요 😉 감사합니다 🙇

[@하횬상]

영상 잘 봤습니다! 학교에서 배우는 실험 내용이 자세하게 나와있어 큰 도움이 됐어요!! 그 외 유익한 정보들이 많아서 좋아요 질문이 있는데요ㅠㅠ 혹시 한천평판배지를 인큐베이터에 넣을 때 왜 반대로 넣는 건가요ㅜㅜ

[@ThisIsGraduateStudent]

여러가지 이유가 있습니다만, 대표적인걸 몇개 알려드릴게요. 1. 배지는 습한 공간이기 때문에, 따뜻한 인큐베이터 내부에서는 뚜껑에 물이 맺힐 수 있습니다. 맺힌 물이 아래로 내려가 배지 위로 떨어진다면 균이 퍼져서 single colony도 없어지고 컨탐의 우려도 생기죠. 2. 뚜껑 위에 가해지는 힘이 없기 때문에 충격과 건조에 취약합니다. 배지 뚜껑은 공기 순환을 위한 미세한 틈이 있는데, 뒤집어 놓지 않으면 그 틈이 조금 잘 벌어집니다. 당연히 인큐베이터의 건조 능력 때문에 배지가 계속 마르게 되죠. 수분이 필요한 미생물에는 치명적입니다. 그리고 뚜껑이 잠기는게 아니라 얹혀져 있기 때문에 약한 충격에도 뚜껑이 휙 열릴수 있습니다. 이 외에도 여러 이유가 있으나 여기까지만 하겠습니다 ㅠㅠ 인터넷 검색하시면 잘 나옵니다!! ㅎㅎ

[@ascendantyjyj]

MYP배지를 제조했는데 7일뒤 사용하려보니 노랑색으로 변색되었어요 이유가 뭘까요ㅠㅠ

[@ThisIsGraduateStudent]

MYP 배지라면 Mannitol egg Yolk agar Plate 말씀하시는 거죠? 저도 예전에 식품 관련 검사할때 사용해봤었죠. MYP 배지에는 pH indicator로 phenol red가 들어있는데, 산성 상태에서 노랗게 변합니다. 아마 세균 또는 진균이 컨탐났을 가능성이 가장 높아 보이네요. 모든 배지는 본래 색깔과 달라졌을 때, 컨탐으로 간주하고 사용하지 않는 것이 좋습니다. 답변이 도움되셨을까요? 😄

[@ascendantyjyj]

@@ThisIsGraduateStudent 그렇군요ㅠㅠ 감사합니다!!답변 감사합니다 회사이서 이제 막 배우는단계여서 모르는게 많네요ㅠ

[@ThisIsGraduateStudent]

@@ascendantyjyj 아주 가끔씩 유튜브 댓글을 달아주셨는데, 묻히는 경우가 있더라구요! 메일로 문의 주시면 좀 더 빠르고 정확하게 답변 드릴 수 있어요 ㅎㅎ [e-mail]입니다. 오늘도 행복한 하루 보내세요 🥰🙋

[@ascendantyjyj]

@@ThisIsGraduateStudent 우와 ㅠㅠ 이메일까지알려주고 ㅠㅠ네네 모르는거잇으면 여쭤보겠습니다 정말 감사해요~~ 행복한하루되세요❤️

[@ascendantyjyj]

@@ThisIsGraduateStudent 안녕하세요 대학원생님 질문드릴게있어 이메일 드렸습니다😭 도움을 주시면 감사하겠습니다🙏🏼

[@user-bv9jk3qf9m]

안녕하세요! 레포트 작성 때문에 찾아 보다 보게 되었는데 혹시 저렇게 만드신 배지를 그 다음엔 어떻게 쓰나요...? 제가 그 면봉 긁어서 한천배지 위에 긁는 거까지만 딱 아는데 이 친구들도 그냥 배지 위에 면봉 같은 걸로 긁으면 되나요...?

[@ThisIsGraduateStudent]

네, 맞습니다! 세균을 면봉 (어플리케이터 라고도 합니다)에 뭍혀서 한천 배지 위에 묻혀주면 됩니다. 그런데 나중에 세균이 자란 다음 구분, 사용하려면 단일집락 (동그랗게 자란 세균 뭉침)이 필요한데, 세균이 뭉쳐진 곳은 단일 집락이 생길 수 없어요. 그래서 세균을 적절하게 펴 발라줘야하는데, 이걸 streaking 이라고 합니다. Streaking에 관한 영상은 아래에 링크 달아드리겠습니다. :)

[@ThisIsGraduateStudent]

kzbin.info/www/bejne/fqGuaXWmj7WDqKc 세균을 스트리킹하는 방법에 대한 영상입니다.

[@ThisIsGraduateStudent]

혹시 더 궁금한 사항 있으시면 [e-mail]으로 메일 주시면 더 자세히 알려드리겠습니다. :)

[@user-bv9jk3qf9m]

@@ThisIsGraduateStudent 너무 빨리 답변해주셔서 진짜 놀랬어요 대학원생분들 다들 바쁘셔서 조금 걸리겠다 했는데 너무 깜짝 놀랬네요 친절하게 링크도 첨부해주시고🥺 해당 영상도 상세히 보고 보고서 작성 때 참고할게요 너무너무 감사합니다 ❗ 적게 일하고 부디 많이 많이 버세요 선생님...🙇👍대학원생 파이팅입니다💪

[@ThisIsGraduateStudent]

@@user-bv9jk3qf9m 하하 마침 컴퓨터로 문서 작업하고 있던 터라 알림을 빨리 볼 수 있었어요. :) 여러 프로토콜도 보유하고 있으니 혹시 필요하시면 언제든지 메일 주세요~! ㅇㅇ님도 화이팅입니다. 좋은 하루 보내세요~🥰🙋‍♂️

[@박홍원-s7x]

안녕하세요. Xld 살모넬라 배양 배지를 만들었는데 배지가 잘 안마르고 항상 물기가 있어서 흐를정도인데 이럴때 xld 배지도 인큐베이터에 하루 보관하면 해결될까요??

[@ThisIsGraduateStudent]

네네 인큐베이터에 보관해보시고, 다음날 아침에 꺼냈을때 배지 표면에 얼룩덜룩한 반점같은게 보이면 아직 덜 말랐다는 뜻이니 2~3시간 간격으로 확인하시면서 저녁까지 더 놔두셔도 됩니다. 저도 길게는 2일 정도 놔둬본것 같아요. 혹시 agar %는 얼마로 잡으시나요??

[@박홍원-s7x]

@@ThisIsGraduateStudent 제가 대학원생이 아니라 일반 학부생인데 졸업논문때문에 질문을 드렸습니다. 그래서 작성자님 질문(몇%인지?)에 대하여 뭐라 설명은 못드리겠지만, xld 분말가루 59g에 증류수 1L, xld vial(째깐한 병)을 첨가하여 녹을때까지 섞으라고 하네용(대신 오토클레이브는 하지말라고 적혀있어요)

[@ThisIsGraduateStudent]

@@박홍원-s7x 아마 전세계 어느 실험실을 가든 고체배지는 1.5%의 agar를 넣고, 반고체배지는 0.3~0.5%의 agar를 첨가하는 방식으로 만들거에요. 그런 경우가 잘 없긴 하지만, 가끔씩 agar 가루를 잘못 계산해서 넣는 바람에 덜 굳는 경우가 생기기도 한답니다. 만약에 XLD agar 자체에 agar가 포함된 제품을 사용하신다면 다른 곳에서 원인을 찾아야겠죠. 오토클레이브를 하지 않는 이유는 아마 안에 포함된 단백질이 autoclave에 의해 파괴될 수 있어서 그럴 겁니다. urea agar도 여과멸균을 거치는 대표적인 배지입니다. 이게 특별히 문제가 되진 않을 거에요. 우선 배지를 잘 말려보고 사용해보세요. 그리고 항상 배지 사용 전에는 인큐베이터에 30분 정도 넣어서 예열해주는 작업이 필요해요~! 다른 궁금한 사항이 있으시면 언제든지 질문 부탁드립니다. ㅎㅎ

[@suruding]

감사합니다!!!!

[@ThisIsGraduateStudent]

시청도 해주시고🙆‍♂️, 댓글도 감사드립니다 😄🙇

[@킹찬-p7t]

배지성능시험 어떻게하는지 알고 싶습니다.

[@ThisIsGraduateStudent]

저희방에서는 세균을 사용하긴 하지만, 세균의 부산물을 좀 더 중시해서 ㅠㅠ 따로 배지 성능시험을 하진 않습니다. 100 CFU로 적게 심어서 자라는지 확인한다고 옆 연구실에서 듣긴 햇는데, 자세히는 잘 모르겠습니다. 죄송합니다 ㅠㅠ 🥺🙇🙇🙇

[@yongji_]

안녕하세요! 영상 너무 잘봤습니다☺️ 혹시 배지 양에 따라서 자라는 균의 수도 달라질까요??

[@ThisIsGraduateStudent]

안녕하세요 😊 결론부터 말씀 드리자면 맞습니다! 베지의 양을 늘리면 늘릴수록 나중에 얻을 수 있는 세균의 최대량은 더 늘어납니다. 도시가 크면 클수록 수용할 수 있는 사람도 더 많아지겠죠? 비슷한 원리입니다 ㅎㅎ 다만 한 가지 주의해야할 점이, 액체 배지의 경우 바닥부분과 표면부분의 거리가 7~10 cm 이상 깊어지면 안 됩니다. 액체 배지도 물이기 때문에 안에 산소나 질소 등 미생물들이 필요한 여러 기체가 녹아드는데, 액체 배지 밑부분은 배지가 깊어질 수록 공기가 닿질 못합니다. 그래서 배지 양을 늘릴 때에는 바닥까지 산소가 닿을 수 있도록 끊임없이 저어주거나, 넓고 얕은 통에 배지를 부어서 세균을 키웁니다. 미생물을 직접 필요로 하거나 또는 미생물에게서 나오는 물질이 대량으로 필요할 때 실시하는 대량 배양은 실험실에선 보통 10~30 L 정도 실시하고, 유산균 업체 등에서는 톤(t) 단위로 실시하기도 합니다. 이해가 되셨나요? 😊🙇

[@yongji_]

@@ThisIsGraduateStudent 와아 이해했습니다!! 빠르고 자세한 답변 감사드려요..!ㅜ🙇🏻

[@ThisIsGraduateStudent]

@@yongji_ 궁금하신게 있으시면 언제든 오세욥 ㅎㅎ 🙋🙇

[@알아두면쓸데있는채널]

안녕하세요. 화장품 미생물 실험에서 tsa배지와 sda배지도 냉장보관하면 3개월~6개월 보관 가능한가요?

[@ThisIsGraduateStudent]

네! 1달 안에 사용하시는게 가장 좋고, 실온에서도 1~2주 정도 보관이 가능합니다. :) 여담으로 SDA는 진균에 사용하시는게 가장 좋긴 하겠네요. ㅎㅎ 굳밤 되세요. 😍

[@임상휘-r8h]

배지가 굳은 이후 파라필름으로 감싸고 인큐베이터에 넣어야하나요?

[@ThisIsGraduateStudent]

아닙니다 어느 정도 기류가 통해야 습도가 빠지게 되는데, 파라필름으로 밀봉될 경우 습도가 빠져나올 수 없어요. 그냥 넣어야합니다. 뚜껑이 위로 가게요!

[@임상휘-r8h]

친절한 답변 감사합니다!

[@우리-q6b8i]

질문이 있습니다! 항상 LB Agar를 쓰다가 이번에 처음으로 Agar가 첨가된 다른 배지를 사용하게 되었는데요! 방법을 보니 오토클레이브에 돌리지 말고, 파우더를 완전히 녹인 다음 항온 수조에서 45~50도 정도로 식힌 다음에 페트리 접시에 부어서 사용하라고 되어 있어서 그대로 했는데 페트리 접시에 붓고 2시간 정도가 지났는데도 굳지 않아서 문제점을 찾으려고 해요ㅠㅠ 파우더랑 증류수 넣고 가열 교반기로 3~40분 가량 가열하면서 교반해주고, 항온 수조에 넣어주니 파우더가 가라앉는 게 계속 보여서 항온 수조에 넣었다가 다시 가열 교반기로 섞어주는 걸 반복했는데 계속 파우더가 가라앉더라고요..ㅜㅜ 그래서 교반한 직후에 바로 페트리 디쉬에 부어서 굳혀지길 기다렸는데 안 굳더라고요! 완전히 녹을 때까지 가열하라고 되어 있긴 하던데 꽤 오래 가열한 것 같아서 분주했는데 제대로 안 된 것 같아서요ㅜㅜ 오토클레이브를 안 돌린 건 이번이 처음이라 어떻게 해야 할 지 잘 모르겠네요..

[@ThisIsGraduateStudent]

혹시 배지 이름, 카탈로그 넘버, 회사명, 이 3가지를 알 수 있을까요?? 저도 데이터시트를 한번 참고해봐야할 것 같아서요. 오토클레이브 하지 않으면 혹시 여과멸균을 해야하진 않나요?? 😯

[@우리-q6b8i]

@@ThisIsGraduateStudent @대학원생인 것 m-Endo Agar LES, 카탈로그 넘버는 MB-E2162이고요! 다른 하나는 Desoxycholate Agar이고 카탈로그 넘버는 MB-D1414에요! 회사는 둘 다 기산바이오입니다!

[@ThisIsGraduateStudent]

@@우리-q6b8i 저도 방금 데이터시트를 꼼꼼히 읽어봤는데 원인을 잘 모르겠어서 한 번 기산바이오에 직접 연락해봤습니다 🙉 기산바이오 측에서는 파우더를 넣고 잘 섞은 다음에 가열해서 끓여주되, 100도씨에 도달하면 그 때부터 1분만 끓이라고 합니다. 그 다음 water bath에서 45-50도로 식혀주고, 분주하면 된다고 합니다. 😮 다른 멸균 없이 가열소독을 거치는 배지라 짧게 가열하는것 같습니다. 한 번 회사측 말대로 먼저 해보시는게 좋을듯 합니다! 🙇

[@우리-q6b8i]

@@ThisIsGraduateStudent 앗 직접 연락까지 해주시다니ㅜㅜ 감사합니다!!

[@ThisIsGraduateStudent]

@@우리-q6b8i 넵 ㅎㅎ 혹시 해보시고 안 되면 다시 댓글에 알려주세용! 우리 해결법을 같이 찾아보아요 😄

[@에잉쯧-y2s]

3:16 ㅠㅜㅠㅜㅜ 너무 웃겨요 ㅠㅜㅠㅡ 사망 쌉가능... 맞지맞지... cell culture 영상보고 왔습니다! 너무 유익하고 재미있어요ㅠㅜ 저도 꼭 이러한 대학원생(노예)이 되고 싶어요!! 한탄은 하겠지만 그래두 생명과학 실험은 재밌으니..ㅎㅎ... 세포만 다뤄보고 미생물 세균은 안다뤄봐서 배지를 어떻게 만드는지 몰랐는데 정말 유익하군용 감사합니다!!

[@ThisIsGraduateStudent]

극찬 감사드립니다 ㅠㅠ🥰 사실 노예의 가장 든든한 식사가 칭찬이거든요 ㅎㅎ 좋은 하루 보내세요 🙇🤭😘

[@에잉쯧-y2s]

@@ThisIsGraduateStudent 대학원생인 것 님도 좋은하루 보내세요! 😆😚

[@김현주-v3t1r]

안녕하세요! 실험 영상 정말 재밌게 잘봤습니다 감사합니다😊 한 가지 질문이 있는데요, lb 배지를 페트리디쉬에 붓고 30분정도 굳힌 후에 바로 균을 도말해도 괜찮나요? 괜찮다면 도말 후 인큐베이터에 배양할 예정인데 이때 파라필름 밀봉이 필요할까요?

[@ThisIsGraduateStudent]

오우 굳힌 후에 바로 배양하는 것은 좋지 않습니다. 물론 진짜 너무 급하면 어쩔수없이 하긴 하는데, 그건 특수배지의 경우입니다. 배지가 굳은 직후에는 아직 물기가 배지 표면에 흥건해서, 이 물기를 꼭 제거한 다음 사용해야 합니다. 인큐베이터에 뚜껑이 위로 가도록 뒤집지말고 하루만 넣어놓으세요. 그러면 바로 다음날 사용 가능합니다. 배지 표면에 물기가 있는 상태 그대로 접종하면, 물을 타고 사방팔방 번져서 단일집락을 얻을 수 없어요

[@ThisIsGraduateStudent]

그리고 밀봉하시면 세균이 숨을 못 쉬어서 죽으니 그냥 뒤집어만 두시면 됩니다 😊

[@김현주-v3t1r]

아이고 큰일 날 뻔했네요! 덕분에 잘 알아갑니다 친절히 설명해 주셔서 감사합니다😊

[@ThisIsGraduateStudent]

@@김현주-v3t1r 넵 ㅎㅎ 감사합니다

[@까마귀-f1k]

@@ThisIsGraduateStudent 그렇다면 혐기성 세균은 접종한 뒤 꼭 밀봉 해야 한다는 말씀이신가요?

[@뉴뉴-l7z]

너무 자세한 답변 감사드립니다! :) 왜 증류수를 쓰면 안되는지도 궁금했었는데, 이해가 되네용!! 그러면 보통 미생물 실험에서 증류수를 직접적으로 사용하는 경우는 배지만들 때 정도일까요~? ㅎㅎ그리고 위에 살모넬라를 말씀해주셨는데, 살모넬라는 사면배지에 천자?하라고 되어있는데 혹시 사면배지에 해야하는 이유가 뭔지 알 수 있을까요? ㅠㅠ 더불어 천자면 천자..표면에 도말이면 도말이 아닌 천자하고 사면 도말(?)까지 하는 이유도 궁금해서 문의드려봅니다!! ㅠㅠ 항상 궁금했던 부분인데 영상을 보다보니,, 혹시 알 수 있을까해서요! 감사합니다!

[@ThisIsGraduateStudent]

증류수를 실험에 사용하는 경우가 간혹 있긴 한데, 제가 지금 밖이라 기억이 안나서 나중에 찾아봐야할 것 같아요 ㅠㅠ 보통 사용하면 염색할 때 균을 슬라이드에 잘 풀어주기 위해 증류수를 쓰기도 합니다. 한 두 방울 떨어트려서 균이 뭉치지 않게 해주는 역할이죠. 살모넬라도 평판배지에 펴기도 합니다. 그건 SSA (살모넬라 쉬겔라 배지, salmonella shigella agar plate) 에 주로 하는데, 살모넬라 또는 쉬겔라를 제외한 대부분의 균이 그 배지에서 잘 못 자라기 때문에, 까맣게 잘 자라있으면 "아, 내가 도말한 균이 살모넬라 또는 쉬겔라 둘 중 하나겠구나"라고 추측할 수 있는 배지인거죠. 이걸 선별배지, 선택배지(selection medium)이라고 합니다. 사면배지에 천자 후 도말하는건 아마 TSI agar 때문일텐데, 그 배지는 시험관에 기울여서 굳혀진 배지입니다. 이 배지에서 살모넬라는 H2S 가스를 방출하고 이건 배지에 까맣게 나타나죠. 그걸 보기 위해 그 배지를 사용하는데, 산소와 직접적으로 닿지 않는 부분에서도 잘 자라는지 보기 위해 시험관 속 배지 깊숙히 균을 찔러넣습니다. 우리가 땅 위에서는 숨을 쉬기 편하지만, 땅 속 깊은 구덩이에서는 훨씬 불편하겠죠? 그것과 비슷한 원리입니다. 지금 제가 자세히는 기억이 안나는데, 제 미생물 영상중 하나에 살모넬라와 쉬겔라가 나올겁니다. 그걸 찾아보시는걸 추천드려요 😊

[@yw6778]

꿀팁 가득한 영상 감사합니다👍 설명 정말 최고에요😂

[@ThisIsGraduateStudent]

오래 전 댓글을 다셨는데 왜 알림이 안 떴을까요🐵🙊 ㅠㅠ 늦게 답글 드려 죄송합니다 ㅠㅠㅠ 장마 조심하시구 건강하세요 🙋‍♂️🥰😄🙇

[@jhjhjbjbm]

ㅎ혹시 전공이..??

[@ThisIsGraduateStudent]

저 임상병리학 전공했어요 😄

[@Jn-oo3wj]

고체 배지와 액체 배지의 보관 기간은 얼마나 되나요? 그리고 고체 배지를 만들때는 lb agar 를 쓴다고 했는데 액체 배지를 만들게 되면 쓰는 가루 이름이 정확히 어떤 건지 궁금해요

[@ThisIsGraduateStudent]

LB는 기본적으로 액체 배지(broth) 형태로 제작합니다. 여기에 Agar를 1.5%가 되게 첨가하면 고체 배지(solid agar plate), 0.3-0.5%가 되게 첨가하면 반고체 배지(semi-solid agar)가 되죠. 가령 LB broth를 만드신다면 1000 mL Distilled water에 LB powder를 넣으시면 되고, LB agar를 만드신다면 1000 mL distilled water에 LB powder와 agar 15 g (final 1.5%)를 넣으시면 됩니다. 액체 배지 + agar = 고체 배지. 고체 배지와 액체 배지는 냉장보관 6개월 정도는 갑니다만, 첨가물이 많이 들어가면 들어갈수록 실온보관 1-3개월 내에 사용하시는게 좋습니다. 가장 좋은 건 만들고 다음 날 바로 사용하시는게 가장 좋죠 😄 혹시 더 궁금한 사항이 있으신가요? 😉

[@임요한-z9n]

6:08 모순이지만 확실한 의미전달! ㅋㅋㅋ

[@ThisIsGraduateStudent]

감사합니다 ㅋㅋㅋㅋㅋㅋ