Приготовление питательных сред для микробиологии. Полный цикл, все этапы. Часть 1

[@roman.s.ovchinnikov]

Друзья, если это видео было полезным, в чем-то помогло вам - поддержите наш канал! money.yandex.ru/to/410011428040460 Как вы понимаете, канал «Микробиология и инфекции» полностью некоммерческий, у нас нет спонсоров, и создавался он не для заработка, а просто чтобы поделиться своим опытом и доступно рассказать о своей профессии - микробиологии. Но съемки видео и монтаж занимают у меня довольно много времени, которое можно было бы потратить на деятельность, привносящую реальный доход. Мне конечно будет очень приятно, если вы выразите свою благодарность в форме добровольных пожертвований. Это будет стимулировать меня снимать новые видео и развивать канал «Микробиология и инфекции». money.yandex.ru/to/410011428040460 По этой ссылке вы можете легко сделать перевод на банковскую карту или кошелек Яндекс-Деньги. Спасибо за ваше участие!

[@СветланаМакарова-в6э]

Спасибо! Очень ждем продолжение.

[@sevdaqurbanova8339]

Спасибо за видео!

[@roman.s.ovchinnikov]

Рад, что понравилось)

[@stuurman8179]

Спасибо за видео! Вот кстати для грибов и дрожжей самой универсальной в плане скорости роста считаю YNB без аминокислот, для идентификации по морфологии YNB morphology agar, а для выделения оооочень хорош оказался Rose bengal agar с хлорамфениколом (до трехсот колоний разных видов без прорастания мицелием соседей на чашке в конце 7 дней роста). На Сабуро далеко не все грибы и дрожжи растут, а нокаут-мутантные штаммы и подавно. Для бактерий R2A позволяет выделить по максимуму видов из природных биотопов, включая экстремальные, даже, порой, УМБ.

[@roman.s.ovchinnikov]

Спасибо за отзыв и за ваш опыт! Я так чувствую, вы выделяете грибы из внешней среды и из подобных объектов? Не из клинических образцов?

[@stuurman8179]

@@roman.s.ovchinnikov Верно, из природных биотопов для фундаментальных исследований структуры или биоразнообразия, с точки зрения биотехнологической значимости. Либо работаю с уже выделенными штаммами из ВКМ.

[@roman.s.ovchinnikov]

@@stuurman8179 Класс, очень интересная область! У меня же в основном клиническая микология, патогенные грибы. Но например была работа по микробиому комаров, несколько интересных видов получили. Сейчас делаем пробы из водоемов (Байкал, Ангара).

[@stuurman8179]

@@roman.s.ovchinnikov Ну, дрожжи и грибы многие вообще считаются условно-патогенными, те же албиканс, парапсилозис и тропикалис с которыми я работал не проявляли патогенных свойств, в ATCC 4 группа(по-моему). Работа по перестройке клеточной стенки при нефтедеструкции. Но вот если инокулят литрами пить или вмазывать в слизистые- думаю тут все плохо закончится. ЗЫ когда комар кусает, обидно не за укус, а за то, что он, зараза, только-что впрыснул в тебя микробиом слюны и ротового аппарата =)

[@roman.s.ovchinnikov]

@@stuurman8179 И кстати дрожжи в микробиоме комара тоже присутствуют). А вы значит тестировали патогенность дрожжей? Каким методом, коллега?

[@ИванТрайно-х1щ]

Кстати, пока вы ждёте, что остынет ваша среда на плите может ли она потерять свою стерильность и нахватать бактерий из воздуха? Может лучше её вообще готовить в автоклаве?

[@roman.s.ovchinnikov]

Иван, среда на плитке не с целью стерилизации! Это подготовительная операция, чтоб растворить компоненты. А потом ее будем стерилизовать, во второй части видео. А это Часть 1!)

[@ИванТрайно-х1щ]

@@roman.s.ovchinnikov а она не успеет затвердеть пока вы будете её стерилизовать?

[@roman.s.ovchinnikov]

@@ИванТрайно-х1щ , встречайте вторую часть видео! Там мы автоклавируем среду, ДО затвердевания! Но даже если затвердеет, а автоклаве она опять расплавиться.

[@НадеждаЕвгеньевна-р8о]

Большая просьба. Покажите пожалуйста как готовить среду Петровского, Китта Тароцци, ПГГА и ПГГБ

[@roman.s.ovchinnikov]

Извините, но это слишком большое задание для меня))

[@ЖеняИванова-я3л]

Здравствуйте. После просмотра видео возникло пару вопросов. Первый - перед приготовление питательных сред Вы не измеряете рН дистиллированной воды? Просто мы в лаборатории, когда я только пришла, научили всегда измерять рН воды перед приготовлением сред (мы и журнал ведем по этой теме). И второй вопрос - по поводу приготовления сборных сред. Если мы готовим сборные среды (любые - простые или более сложные: ЗПВ, Сабуро, картофельно-глюкозный агар, Китта-Тароцци и другие), то всегда при приготовлении сборных сред ссылаемся на ГОСТ или МУК, в котором прописано, как готовить те или иные сборные среды (и у нас журнал есть, где мы прописываем приготовление сред и по каком документу готовим сборные). И разве приготовление сборной среды в лаборатории по банке одного из производителей не является нарушением авторских прав производителя? И такой еще вопрос: в университете и на работе уже мня всегда учили, что глюкозу лучше добавлять в холодную или максимум еле теплю воду. Или допускаются еще варианты?

[@roman.s.ovchinnikov]

Конструктивные вопросы. рН вижу смысл измерять уже в смеси. По поводу инструкции на банке и авторских прав не вижу связи. Изготовитель специально для нас пишет эту инструкцию. Про добавление глюкозы возможно вы и правы. Но почему так рекомендуют, вам не сказали?

[@ЖеняИванова-я3л]

@@roman.s.ovchinnikov 1.По поводу рН воды. У нас аквадистилляторы проходятплановую поверку, чистку регулярно и рН воды мы измеряем для того, чтобы проверить текущую работу (если можно так выразиться) дистиллятора. И тем более есть ГОСТ по воде - 6709-72, где написано, что рН воды должно быть от 5 до 7 и если результат не в этих границах, то проводятся корректирующие действия - внеплановая проверка дистиллятора. Ведь питательные среды - основа всего, от них зависит ход исследования и важен каждый момент. А среды делаются из дистиллированной воды, поэтому мы и ее проверяем и журнал ведём. 2.По поводу авторских прав. Я работаю в отделе приготовления питательных сред и у нас есть журнал, где мы прописываем когда, сколько и что мы приготовили (по заявкам на среды от других специалистов, которые работают в заразной зоне). И когда возникает вопрос о сборных средах, то коллеги всегда приносят рецепт из МУКа или ГОСТа, с которым работают (например, ГОСТ на исследование молочной продукции, им оттуда нужна сборная среда - любая, они распечатывают рецепт на нужную среду по установленной у нас форме и приносят) и мы в журнале прописываем откуда взяли рецепт (номер ГОСТа или МУКа). Просто, когда я пришла, мне рассказывали историю, что как то приготовили среду сборную по рецепту по банке от производителя, в журнале не прописали откуда рецепт, потом комиссия пришла, были разбирательства по этому поводу долготе. Вопрос был в том, что производитель выдержал свою методику приготовления среды, все сам посчитал, выдал паспорт соответствия (качества), а мы просто "переписали" все это, хотя права не имели. И как сказала комиссия: для сборных сред есть нормативные документы, которыми имеют право пользоваться все и ссылаться тоже. А производителей много, у каждого своя технология производства. Приведу пример по поводу срока хранения сред. Например, среда эндо. От ФБУН г. Оболенск готовая среда используется в день приготовления, а от ООО Биотехновация 5 дней, то есть два разных производителя, две разные методики производства, а мы просто взяли и переписали состав, приготовили, не зная всей сути. 3.По поводу глюкозы. Самой интересен этот момент. Пыталась найти информацию сама. Но как мне объясняли, что нельзя растворять глюкозу в горячей воде, потому что это повлияет на качество среды в худшую сторону и ход исследования будет неверным (скорее, результаты будут недостоверными)

[@ЖеняИванова-я3л]

@@roman.s.ovchinnikov И ещё хочу немного дополнить. Некоторые среды мы готовим в термостойких колбах с ватно-марлевыми крышками, завернутыми в бумагу, так как некоторые среды не автоклавируется, например,селенитовый бульон. Мы в колбе его приготовили и над спиртовкой в ламинаре его различаем.

[@roman.s.ovchinnikov]

@@ЖеняИванова-я3л да, в приготовлении сред много нюансов. В этом видео я говорю о базовых вещах.

[@roman.s.ovchinnikov]

@@ЖеняИванова-я3л спасибо за подробный комментарий. Вы явно работаете в испытательной лаборатории, поэтому у вас всё так дотошно. В других лабораториях в основном делают среды по инструкциям производителя без дополнительных заморочек

[@Alex-cs2ws]

А что использовать вместо пептона ?Подскажите пожалуйста!

[@roman.s.ovchinnikov]

Если в рецепте среды написано пептон - значит надо использовать только пептон. В основном пептон мясной, из казеина молока, но бывает и рыбный. Есть растительный аналог пептона, из соевого белка.

[@Alex-cs2ws]

@@roman.s.ovchinnikov а можно пептон сделать в ручную из мяса,и с минимальными затратами?

[@Alex-cs2ws]

@@roman.s.ovchinnikov а то в моем городке пептона нет,а доставка по почте дело сомнительное!

[@roman.s.ovchinnikov]

@@Alex-cs2ws Некоторые среды готовят на мясном бульоне, там надо просто сварить мясо. Можете поискать подробнее информацию в инете, типа "мясной агар"

[@roman.s.ovchinnikov]

@@Alex-cs2ws Пептон сухой, хранится долго, при пересылке по почте ничего с ним не случится (скорее всего)

[@jjdf136]

Подскажите пожалуйста, какая кислотность необходима от 6,5 до 7, при каких значениях надо балансировать PH. Подскажите какая навеска была для Агара (на весах)

[@roman.s.ovchinnikov]

Не очень понял первую часть вопроса. Навеска агара была 15 г. Это довольно стандартное количество агара - 15 г на литр, применяется во многих средах.

[@jjdf136]

@@roman.s.ovchinnikov Спасибо, в первой части вопроса имел ввиду какая кислотность должна быть пригодной (какая норма в пределах от 6,5 до 7 ph?, а если выше или ниже уже то тогда нужно балансировать PH в пределя от 6,5-7 ?)

[@roman.s.ovchinnikov]

@@jjdf136 Все значения от 6,5 до 7,0 - это норма. Если выше или ниже - надо корректировать.

[@jjdf136]

@@roman.s.ovchinnikov Спасибо понятно.

[@alish_r33]

Очень познавательно 👍🏻

[@roman.s.ovchinnikov]

Спасибо!)

[@Dimgames]

Здравствуйте расскажите какой лучше автоклав купить домой для стерелизации сред

[@roman.s.ovchinnikov]

Домой никакой автоклав покупать не советую. Это прибор повышенной опасности.

[@Dimgames]

@@roman.s.ovchinnikov я уже купил на 26 литров для заготовки банок с тушенкой

[@Dimgames]

его качество сборки и сварные швы оставляют желать лучшего(

[@roman.s.ovchinnikov]

@@Dimgames Видимо бытовой, типа скороварки? Я говорил про профессиональные аппараты, их домой лучше не надо)

[@roman.s.ovchinnikov]

@@Dimgames это плохо. Высокое давление - не шутки.

[@Elegancyman]

а грамм сколько агар агара вы добавили? и что за кислоты и щелочи лучше применять?

[@roman.s.ovchinnikov]

В большинство сред добавляется 10-15 грамм агара

[@Elegancyman]

@@roman.s.ovchinnikov спасибо👍

[@inganaimushina1590]

Здравствуйте, извиняюсь за свою неграмотность и поэтому обращаюсь к вам за консультацией - можно в домашних условиях приготовить питательную среду для посева семян орхидей, у меня зреет семенная коробочка ?! Или проще приобрести ингредиенты для п/среды? Спасибо!

[@roman.s.ovchinnikov]

Увы, не знаю состав среды для орхидей) и нужна ли там стерильность..

[@ИванТрайно-х1щ]

Можно ли применять глюкозу, которая продаётся в таблетках в аптеке?

[@Guzal_kamalova]

Не желательно т.к. могут быть примеси, лучше все реактивы использовать с меткой ЧДА или ХЧ

[@roman.s.ovchinnikov]

@@Guzal_kamalova Всё верно, для приготовления сред берут лабораторные стандартизованные реагенты. Иначе ее ростовые свойства могут измениться.

[@ИванТрайно-х1щ]

Какие кислоты и щелочи (каких металлов) можно применять для регулировки рН?

[@Guzal_kamalova]

Используют соляную кислоту для понижения рН,а для поднятия едкий натрий 0,1 М

[@roman.s.ovchinnikov]

Все верно ответила Гузаль - HCl и NaOH определенных концентраций.

[@maxon9832]

@@roman.s.ovchinnikov кальций (мел) допустимо использовать для регуляции PH ?

[@roman.s.ovchinnikov]

@@maxon9832 Не надо самодеятельности при приготовлении питательных сред, я считаю.

[@ВасилисаПримудрая-х9ц]

@@maxon9832 Среда 10. Для выделения культур Clostridium, (г/л): КН2РО4 - 0,5, К2НРО4 - 0,5, MgS04 - 0,5, NaCl - 0,5, вода водопроводная, глюкоза - 20, пептон - 5, CaCO3 - 10, рН - 7,0. studfile.net/preview/5244850/page:17/ === Мел вешанке добавляют.

[@ИванТрайно-х1щ]

а эта среда вообще на сколько универсальна? многие ли бактерии в ней прорастут? я слышал что её широко применяют для грибков

[@Guzal_kamalova]

Среда довольно универсальна,хотя она ориентирована на рост грибов,на ней многие бактерии также неплохо растут,если добавить хлорамфеникол - рост бактерий будут подавляться . Тогда на этой среде будут расти только грибы.

[@roman.s.ovchinnikov]

И опять Гузаль за меня всё верно ответила. Сабуро предназначена для грибов, но могут вырасти и бактерии. Обычно ее используют с добавлением хлорамфеникола, чтоб росли только грибы. Она широко используется для микологических анализов.

[@ТаняМорозихина-к6ы]

Мы на ней выращиваем дрожжи, плесень и грибы

[@aigulaigul6837]

Спасибо за сегодняшнее видео! Планируете ли Вы классы по методу мембранной фильтрации? Очень хотелось бы увидеть.

[@roman.s.ovchinnikov]

Благодарю за отзыв! Вы предлагаете интересную тему, хотя сам я пользуюсь этим методом довольно ограниченно. Но буду иметь ввиду.

[@aigulaigul6837]

@@roman.s.ovchinnikov Спасибо. Вы больше специализируетесь в клинической микробиологии?

[@roman.s.ovchinnikov]

@@aigulaigul6837 Да, конечно. Микробиологическая диагностика.

[@roman.s.ovchinnikov]

@@aigulaigul6837 Да, именно так.

[@ТаняМорозихина-к6ы]

Тоже хотелось бы про мембранную фильтрацию!)))

[@ИванТрайно-х1щ]

И второй вопрос. А кнопки всех приборов применяемых в приготовлении (весы, ноутбук и др.) должны быть стерильными? Если да то чем их можно стерилизовать в домашних условиях?

[@Guzal_kamalova]

Приборы стерильными не могут быть в средоварочной, там нет такой необходимости,все приборы должны быть чистыми и в рабочем состоянии( проводить каждое утро калибровку) ,можно поверхности столов и приборов протирать этиловым спиртом 70 % или другими дезинфектантами для обработки поверхностей

[@roman.s.ovchinnikov]

Эти приборы не могут и не должны быть стерильными! Ибо готовят среду в нестерильных условиях, а потом стерилизуют (автоклавируют).

[@zehraalieva7167]

Спасибо

[@sergzverdayz]

Подскажите пожалуйста, где брать рецепты сред для микро клонирования растений? Заранее спасибо

[@ВикторМ-в6э]

В интернете только искать. Единственное что могу подсказать, что по любому должен в составе быть комплекс NPK, плюс магний и микроэлементы (Fe, Mn, B, Mo, Co). То есть по сути все питательные элементы, которые потребны для нормального развития растений в земле. Экспериментировать нужно. Я бы на Вашем месте поэкспериментировал с обычной водой, в которую добавить немного удобрений комплексных,плюс микроэлементы - всё продается в магазинах для сада. Может ещё немного гумата калия добавить. Ну и естественно загуститель - агар. Агара думаю немного, грамм 10 на литр. Потому что растению нужно будет корни пускать, а в плотный агар тяжело им будет проникать.

[@ВикторМ-в6э]

ru.m.wikipedia.org/wiki/%D0%A1%D1%80%D0%B5%D0%B4%D0%B0_%D0%9C%D1%83%D1%80%D0%B0%D1%81%D0%B8%D0%B3%D0%B5_%E2%80%94_%D0%A1%D0%BA%D1%83%D0%B3%D0%B0 Среда Мурасиге-Скуга

[@ВикторМ-в6э]

ЭДТА - это Трилон-Б так он в продаже называется. Нужно будет трилон с содой питьевой смешать, чтобы нейтрализовать. Получится натриевая соль трилона Б, а потом уже смешать FeCl2 с натриевой солью трилона Б. Получится железная соль трилона Б, более известная среди садоводов как хелат железа.

[@ВикторМ-в6э]

kzbin.info/www/bejne/jnqVi3qJeNuSlassi=KzluY8wHTMjzF8eY

[@lexanghik2003]

А можно просто сделать на дистиллированной воде и желатине питательную среду?

[@roman.s.ovchinnikov]

Можно сделать желатиновую среду. Но на ней мало кто сможет расти. Не все микробы способны гидролизовать желатин как единственный источник белка.

[@ВасилисаПримудрая-х9ц]

Желатин "плывёт" при нужных для роста температурах.

[@СветланаП-у6б]

А сколько агар-агар? На половину объема взяли?

[@roman.s.ovchinnikov]

Нет. Количество агара берется по прописи конкретной среды. В данном случае 15 г на 1 л.

[@ТаняМорозихина-к6ы]

Вопрос,флаконы для розлива питательных сред предварительно нужно стерилизовать автоклавированием или можно упустить этот момент??

[@roman.s.ovchinnikov]

Пустые флаконы до разливки стерилизовать не надо! Всё и так простерилизуется при автоклавировании среды.

[@ТаняМорозихина-к6ы]

@@roman.s.ovchinnikov спасибо))

[@zaibusinka]

@@roman.s.ovchinnikov работала в семи лабораториях и нигде не использовали для сред нестерильную посуду, кроме особо оговоренных в прописях случаев.

[@roman.s.ovchinnikov]

@@zaibusinka Перед автоклавированием разливали среды в стерильную посуду? Смысл? Основания какие? Двойная работа.

[@zaibusinka]

@@roman.s.ovchinnikov по моим гостам и му стерилизация посуды 30 минут 121°C, стерилизация сред 12-15 минут 121°C. Т.е. при автоклавировании сред условия стерилизации посуды не выполняются

[@evgeniyaplatonova1305]

А зачем воду разогревать, вы же потом всё равно стерилизовать в автоклаве будете? Там потом прекрасно всё растворится под температурой, главное - перемешать тщательно. Получается, только для замера pH? А не происходит ли изменения после автокоавирования? Какая-то часть воды ведь всё равно испаряется и оседает на крышке/в фольге, это влияет на концентрацию и, соответственно, на pH. Или нет?

[@roman.s.ovchinnikov]

Воду разогревают по двум причинам. 1. В инструкции написано - прогреть до кипения для полного растворения. Значит надо прогревать. 2. Если этого не делать, несмотря на автоклавирование среда не будет однородной. В застывшем флаконе будут видны слои, это личный опыт. В итоге, надо прогревать. рН действительно надо измерять после автоклавирования то же.

[@ИванТрайно-х1щ]

Можно ли применять кипячёную воду вместо дистиллята?

[@Guzal_kamalova]

Если есть дистиллированная вода,то используйте ее. Кипяченая вода не желательна,т.к. она не достаточна чистая(в смысле минералы не все в осадок выпадают)

[@roman.s.ovchinnikov]

Как уже говорилось, вода из-под крана, пускай и кипяченая, будет влиять на минеральный состав среды.

[@Minivan4444]

Подскажите, можно ли в домашних условиях приготовить среду для Bacillus turingensis?

[@roman.s.ovchinnikov]

Как конкретно называется среда? Какая пропись?

[@Minivan4444]

@@roman.s.ovchinnikov ух, я и не думал что дождусь ответа. Попозже найду патент, и там есть описание на каких средах делали. Скину ссылку.

[@Minivan4444]

@@roman.s.ovchinnikov Добрый день. Вот здесь есть описание на каких средах делали и где лучше результат edrid.ru/rid/216.013.6d56.html И у меня вопрос: каким простым путём можно приготовить пит.среду(в жидком виде) и размножить эту бактерию? Помогите пожалуйста.

[@roman.s.ovchinnikov]

@@Minivan4444 При всем уважении у меня нет возможности это всё прочитать. Пришлите конкретную пропись. При приготовлении любой среды главное - ее грамотно простерилизовать.

[@Minivan4444]

@@roman.s.ovchinnikov ок, перепишу все среды на которых проводили испытания. Но одну среду помню: мясопептонная.

[@Elena_ua]

Разве не лучше варить среду в стеклянной колбе из термостойкого стекла там хорошо видно есть ли осадок, растворились все частицы или нет

[@roman.s.ovchinnikov]

У вас есть личный опыт применения таких колб? Если вы уверены, что они имеют преимущества, то благодарю вас за эту ремарку.

[@zaibusinka]

Растворимость видна в любой посуде - после минут трёх несильного кипения раствор становится прозрачным и прекрасно видно что осталось нерастворенным или пригоревшим. По своему опыту могу сказать, что нерастворяются только изначально не размешанные комочки при очень быстром нагреве.

[@Elena_ua]

@@zaibusinka кастрюля это не лабораторная посуда

[@zaibusinka]

@@Elena_ua в богатой лаборатории работаете, раз не приходится ничего изобретать )))

[@miumiu6285]

Здравствуйте, подскажите, пожалуйста, можно ли заменить агар-агар в среде на какой-то минеральный уплотнитель, кроме силикагеля. Конкретно Мурасиге-Скуга интересует, но можно и варианты в других средах🙏

[@roman.s.ovchinnikov]

Обычно применяют агар, хороших аналогов я не могу назвать. Есть желатиновые среды, но это другое.

[@zaibusinka]

Нет. Посмотрите среды лидеров мирового рынка, уж у них-то есть все возможности, но используют агар-агар. (Желатиновая среда это отдельный тест, в качестве основы не пойдёт)

[@belladonna4612]

Получается для набора каждого компонента нужна новая ложка?

[@roman.s.ovchinnikov]

Да, конечно. Чтобы не загрязнять компоненты в банках.

[@ОльгаизАчинскаКрасноярскийкрай]

Музыка фоном мешает

[@roman.s.ovchinnikov]

Услышал вас

[@VitalySarychev]

Хорошо видно, что это микробиолог а не химик;) химик никогда в жизни не всыпал бы остатки порошка из мерной ложки ОБРАТНО в банку с чистым веществом;)) 10 раз так всыплешь и прости прощай чистота для анализа. А то и 1 раза хватит.

[@roman.s.ovchinnikov]

Ок, услышал)) А если мы каждый раз будем высыпать в мусор остатки, никаких сред и реагентов не напасешься)

[@ilkinmursalov1378]

Здравствуйте. Я пишу вам из Азербайджана. Можно с вами связаться по watsapp

[@Дмитрий-ц9п9е]

Это все не для обывателя , нам нужны колхозные методы 😅, сейчас даже глюкоза по рецепту не говоря уже про антибиотики

[@roman.s.ovchinnikov]

Мой канал в основном для микробиологов. Действительно, не для обывателей)