Cultivo in vitro. Definición y preparación | 32/95 | UPV

[@CamiHeisenberg]

Me ha volado la cabeza esta explicación. Me pareció todo entretenido a la hora de realizar la preparación y los cortes. Muy bueno, se agradece!

[@AdrianTorresAlx]

Muy buen video pero en mi experiencia he visto errores como no dejar enfriar las pinzas antes de tocar un explante ya que podrían quemarlo, además de que el usuario posee un reloj al momento de una siembra que no es algo recomendable ya que podría albergar esporas hongos y bacterias, mis felicitaciones.

[@UPV]

Cierto. Hay que tener cuidado y evitar quemar los explantes. Conviene esperar un tiempo a que se enfrié el instrumental. También es cierto que conviene evitar llevar reloj, porque puede ser una fuente de contaminación. Un saludo Miguel

[@beatrizaguilar3263]

Si al igual para asegurar el trabajo hay que usar guantes, lentes, mascarilla y desinfección cada sierto tiempo y por supuesto dejar que los instrumentos se unfrien porque corre el riesgo de quemar el explante

[@joseceballos1537]

Excelente video , algún día quisiera dedicarme a ese trabajo me encantó

[@hugopacsi6078]

Gracias por la demostración muy práctica.

[@blancacarlosama4116]

Felicitaciones por la explicación solo el compuesto del líquido quiero saber por favor expliqué en uno de sus videos estaré atenta

[@rosacristinavillanueva2590]

Interesante, una consulta, que tipo de papel filtro utilizan?

[@UPV]

Muchas gracias. Utilizamos papel estándar de filtro. Uno de 60 g/m2 es suficiente. Lo venden en resmas de 42 x 52 cm que cortamos a la medida que necesitamos. Luego lo autoclavamos y lo abrimos dentro de la cabina de flujo laminar para evitar contaminaciones y se manipula con pinzas. Cualquier empresa de suministro de material de laboratorio lo debe de tener disponible.

[@marcelogualavisi2469]

Muy didáctico el video, una consulta, el medio de cultivo además de murashige skoog que fitohormona recomienda para estimular el desarrollo de yemas, tengo el problema que no desarrolla las yemas en los tubos

[@UPV]

El profesor responde: "Los reguladores del crecimiento dependen de la especie a utilizar. Se pueden utilizar auxinas o giberelinas por ejemplo. En nuestro caso con la especie que aparece en el video (pepino dulce, Solanum muricatum) no es necesario añadir ningún regulador del cruzamiento, pero con otras especies es necesario. Muchas gracias por tu consulta"

[@Ftron-er4qm]

Hola, muy interesante el video , qué plantas son fáciles para este tipo de cultivo y cuales no???

[@ricardodmm3809]

Maravilha! Muito prático suas explicações. Parabéns!

[@juancpalacio89]

Hola, no necesitaríamos de alguna hormona para incitar el crecimiento de raíces y con este procedimiento en cuanto tiempo en promedio veríamos raíces. Muchas gracias

[@migueltavera958]

Excelente video muy didactico

[@yefersonarroyoalvarez6745]

He oído que se usa vendaje para la siembra de los explantes. Es cierto ?, Y que tipo de vendaje se usa?

[@UPV]

El profesor responde: "Muchas gracias por tu pregunta Yeferson, pero no se a qué te refieres. Los explantes no se recubren de ningún material. En el medio de cultivo se pueden añadir diversas sustancias para favorecer su desarrollo. Pero ningún vendaje. La placa sí que se puede cubrir para mantenerla en oscuridad al inicio del cultivo en algunas especies por si te refieres a eso. Si te refieres al operador o la persona que lo realiza. A veces se puede llevar mascarilla, pero en condiciones normales no es necesario. Es más importante que la cabina de flujo laminar esté en condiciones y manipular el material con precauciones para no contaminarlo."

[@manuelaugustovillanuevavac9620]

Que agar estas usando en el tubo de ensayo? es recomendable usar ese agar con semillas?

[@UPV]

El profesor responde: "Gracias por tu pregunta. El agar es un agar comercial común. Para el cultivo de semillas se puede utilizar, pero habría que ver si la especie en concreto que utilices tiene algún requerimiento especial. Un saludo"

[@angelitasofiaortizbastidas4051]

Muchas gracias por la explicación! Me ayudarían con los nombres de los agares que son óptimos para sembrar in vitro. Gracias

[@UPV]

La respuesta del autor del vídeo Leiva Brondo, Miguel es la siguiente: Me alegro que te haya sido de utilidad el video, Angelita Sofia. Sobre el tipo de agar depende de la especie que se vaya a utilizar. Lo mejor en estos casos es ver artículos donde se cultive la especie que quieres y consultar qué agar han utilizado.

[@luzmariaramirezcandelario1661]

Hola, me gusto la explicación. Pero tengo duda en el funcionamiento de la cámara de cultivo. Podría hacer un video de esa parte?

[@UPV]

El profesor responde: "Me alegro que te haya sido de utilidad. Tomo nota de tu sugerencia y lo intentaré hacer. Un saludo"

[@rodrigoferriz8267]

Hola 1 seria un clon del original si se hace de una planta la planta nueva tendria toda la informacion de la planta madre ? me refiero a que si en teoria tendria la misma edad 2 es como un esqueje pero con mayor cuidados y mas especializado?

[@UPV]

El profesor responde: Muchas gracias por tu pregunta Rodrigo. 1. Sería genéticamente idéntica a la planta de partida, es decir un clon. Pero respecto a la edad no sería la misma. Se considera una planta nueva. 2. Es como un esqueje, pero al realizarlo en condiciones axénicas está libre de hongos o bacterias.

[@jorgeluissolermontilla2411]

Saludo me gustaría saber qué utiliza en los tuvo de ensayo

[@UPV]

Esta consulta está respondida en varios de los comentarios anteriores: ""Se utiliza un medio con sales MS, sacarosa y agar."

[@NevermoreForever]

¿Que lleva el líquido ese? ¿Sería sencillo hacerlo en casa por curiosidad ?

[@UPV]

El profesor responde: "El medio de cultivo es el descrito por Mursshige y Skoog (MS). Se vende comercialmente y también se puede preparar, pero necesitas varios reactivos y equipamiento básico de laboratorio. También tienes que tener en cuenta que necesitas instalaciones para realizar el cultivo y mantener las plantas. Muchas gracias por tu consulta"

[@geronimoandrada9248]

Hola como puedo hacer un medio de cultivo para hacer la reproduccion in vitro? no quiero comprar un medio quiero la experiencia de hacer mi propio cultivo. O podrias decirme las proporciones de los nutrientes para un buen medio?

[@UPV]

El profesor comenta: Hola Geronimo, El medio más común es el de Murashige & Skoog (MS), que puedes consultar en este artículo. MURASHIGE, T. & SKOOG, F. (1962) ‘A Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures’, Physiologia Plantarum, 15(3), pp. 473-497. doi: 10.1111/j.1399-054.1962.tb08052.x. Son bastantes elementos y puedes decidir hacerlo o comprarlo ya elaborado. Tiene la siguiente composición: Sales principales (macronutrientes) • Nitrato de amonio (NH4NO3) 1,650 mg/l • Cloruro de calcio (CaCl2 · 2H2O) 440 mg/l • Sulfato de magnesio MgSO4 · 7H2O) 370 mg/l • Fosfato de potasio (KH2PO4) 170 mg/l • Nitrato de potasio (KNO3) 1,900 mg/l Sales menores (micronutrientes) • Ácido bórico (H3BO3) 6.2 mg/l • Cloruro de cobalto (CoCl2 · 6H2O) 0.025 mg/l • Sulfato cúprico (CuSO4 · 5H2O) 0.025 mg/l • Sulfato ferroso (FeSO4 · 7H2O) 27.8 mg/l • Sulfato de manganeso (MnSO4 · 4H2O) 22.3 mg/l • Yoduro de potasio (KI) 0.83 mg/l • Molibdato de sodio (Na2MoO4 · 2H2O) 0.25 mg/l • Sulfato de zinc (ZnSO4·7H2O) 8.6 mg/l • Na2EDTA · 2H2O 37.2 mg/l Vitaminas • i-Inositol 100 mg/l • Niacina 0.5 mg/l • Piridoxina · HCl 0.5 mg/l • Tiamina · HCl 0.1 mg/l • Glicinas 2 mg/l • Edamina (opcional) 1 g/l Un saludo

[@Nohemi1952]

Se podria sustituir con otro,, cuando uno no tiene dinero, se podria hacer de forma casera y que cumpla con el mismo proposito@@UPV

[@benn5629]

¿Qué tipo de luz se usa para el crecimiento de las plantas in vitro? Gracias

[@UPV]

El profesor responde: "Muchas gracias por tu pregunta. Lo habitual es utilizar tubos fluorescentes con una longitud de onda entre 350 y 750 nm, pero actualmente se utilizan tubos LED que pueden combinar distintas longitudes de onda y utilizar solo las longitudes de onda que sean activas para la fotosíntesis. Se pueden utilizar luz blanca, roja o azul o combinaciones de las mismas. Dependiendo de la especie o variedad son más óptimas unas combinaciones que otras. En este artículo puedes encontrar una revisión. Fundamentals and applications of light-emitting diodes (LEDs) in in vitro plant growth and morphogenesis link.springer.com/article/10.1007/s11816-013-0277-0 Espero que te sea de utilidad. Un saludo"

[@benn5629]

@@UPV Muchas gracias

[@bretturner3413]

realmente super video,obrigado pela classe.

[@gustavoespindola8238]

Como se prepara ese medio de cultivo?

[@UPV]

El profesor responde: "Muchas gracias por tu pregunta . El medio de cultivo lleva una solución mineral de Murashige y Skoog, sacarosa y agar como agente gelificante que se esterliza previamente. En este artículo puedes ver el protocolo con más detalle : link.springer.com/article/10.1007/BF00234297 Un saludo"

[@NAO-zm6im]

Buen día, disculpe ¿El agar que utiliza es "agar-agar" ? o ¿Se utiliza uno en específico?

[@UPV]

El profesor responde: "Muchas gracias por la consulta. En nuestro caso sí que utilizamos agar-agar, pero se pueden utilizar otros. Depende del cultivo que se vaya a utilizar a veces hay algunos que funcionan mejor que otros, pero en general el agar-agar funciona bien."

[@NAO-zm6im]

@@UPV Muchas gracias por su atención.

[@mariadelapazsantana6409]

Hola Miguel me podria ayudar indicandome que equipo se necesita para instalar un laboratorio en el que se hagan cultivos de semiilas de orquideas in vitro. quiero conseguir ayuda monetaria para hacer este proceso pero no se que equipo sea necesario. Gracias.

[@UPV]

Hola María, Yo no trabajo con orquídeas, pero básicamente el material sería el mismo. Necesitas: - una cámara donde mantener la temperatura e iluminación adecuada - una forma de esterilizar los medios y el material a utilizar (un autoclave es lo que se utiliza en un laboratorio) - Un lugar donde hacer el cultivo axénico (en el laboratorio una cabina de flujo laminar) - Reguladores del crecimiento y medio de cultivo apropiado a la variedad que vayas a cultivar. Te recomiendo que busques artículos científicos sobre la variedad que vayas a cultivar para ver las necesidades exactas del cultivo. Un saludo Miguel

[@RichardCardenaskn]

Buenas tardes, tengo una consulta: esto se puede aplicar para clonar plantines de aguacate?? Slds interesante video

[@Fabian-lr6bj]

Richard Cardenas amigo se puede utilizar toro tipo de material vegetal Sólo que tienes que tener protocolos establecidos para cada especie

[@RichardCardenaskn]

@@Fabian-lr6bj, muchas gracias por su respuesta. Tengo otra interrogante. ¿Qué diferencias hay en llevar una planta desde semilla o hacer un clon? Ventajas o desventajas// slds desde Perú

[@Fabian-lr6bj]

Richard Cardenas si introduces in vitro semillas de una especie y los protocolos de desinfeccion resultan satisfactorios obtienes un plantin del cual puedes multiplicar y obtener con el tiempo cientos de clones de esa planta Los inconvenientes pueden ser sólo la contaminación que pueden llegar a tener si no realizas un buen protocolo de desinfeccion en todas las fases del cultivo in vitro

[@Fabian-lr6bj]

Además para el tema de la palta o aguacate debes realizar tratamientos pre germinativos Para romper la latencia de la semilla del aguacate (Si es que quieres trabajar con semilla) Porque también puedes trabajar en embriogenesis somatica

[@RichardCardenaskn]

Hola Fabian, Te comento ahora mismo en Perú no hay semillas de aguacate, por eso me a parecido muy bueno el video tuyo, bueno seguiré investigando más de la embriogenesis somática, porque pienso realizarlo. Muy amable por contestar, gracias.

[@pablogiraldoz1]

muchas gracias por la explicacion

[@UPV]

Muchas gracias Un saludo Miguel

[@victorcruz4176]

Hola muy buenas tardes ... Tengo una pregunta . Tipo de agar para cymbidium orquideas tengo 6 tipos de cymbidium cada una con 3 capsulas de semillas ... Pero quiero saver si se puede hacer el invitro con el agar que uso para las phalaenopsis

[@UPV]

El profesor comenta: ""No he trabajado con orquídeas por lo que no puedo ayudarte. Lo siento."

[@diegosimbana2619]

Medio MS

[@OlGuiTa08]

Hola Miguel, primero que todo, gracias por el video, me sirvió mucho. Quisiera saber...cuánto tiempo deben mantenerse los medios de cultivo en las cámaras de cultivo? En cuánto tiempo se lleva a cabo el proceso de aclimatación en un invernadero y cuánto tiempo se demora el establecimiento en campo de la especia. Muchas gracias.

[@cryo_bioras1683]

Hola Olga, el tiempo de cultivo depende de la especie vegetal, tipo de material con que se inicie el cultivo. Asimismo, la aclimatación en un invernadero dependerá de la especie. Saludos

[@UPV]

Cierto. El tiempo y la aclimatación depende da cada especie y variedad. Un saludo Miguel

[@alfredodiazhernandez7122]

MU INTERESANTE MUY BUENA INFORMACION

[@UPV]

Muchas gracias Un saludo Miguel

[@luciarosasrodriguez351]

Buen vídeo sólo una pregunta ¿Qué utiliza cómo sustrato?

[@UPV]

El profesor comenta: ""Se utiliza un medio con sales MS, sacarosa y agar."

[@Shymbolum]

gracias ,muy bien explicado.

[@UPV]

Muchas gracias Un saludo Miguel

[@ivanapp1]

Disculpen, me podrían indicar ¿Qué método utilizaron para llegar a tener las plantas axénicas? y ¿a qué temperatura y con qué intensidad lumínica se incuban luego de haber sembrado en el medio?

[@UPV]

El profesor comenta: "Para obtener las plantas axénicas lo más habitual es coger semillas o tallos (dependiendo del método de propagación de la especie) y limpiarlas con lejía (la concentración y tiempo depende del órgano a utilizar y la especie que se trabaje) y posteriormente lavarlas con agua estéril dentro de la cabina de flujo laminar. Una vez hecho se ponen en el medio de cultivo adecuado a la especie y órgano de propagación y se espera a que se desarrolle la nueva plántula. Sobre la temperatura y condiciones de iluminación también depende de la especie, pero una temperatura diurna de 25 ºC y noctura de 18 ºC y un fotoperiodo de 16 horas suele funcionar con la mayoría. Sobre la intensidad lumínica se puede utilizar 65-85 micromol sec-1 m-2.

[@alexandrezangelmi5983]

no puedo establecer un medio para cultivar el meristema familiar crasulaceae, me podría ayudar con el medio de cultivo

[@UPV]

El profesor comenta: "Yo no trabajo con crasulaceas, pero puedes buscar información en estos artículos: doi.org/10.1016/S0304-4238(98)00250-7 doi.org/10.1016/j.sajb.2018.01.001 doi.org/10.1016/j.scienta.2008.05.042 Espero que te sean de utilidad ".

[@leoalejandro1989]

Hola. Ustedes no tiene cursos virtuales? Yo vivo en Colombia, soy químico de profesión y Magister en ciencias químicas-Investigación. Actualmente estoy en un proyecto y me gustaría tomar cursos de estos y no los brindan en Colombia extrañamente. Quedo atento.

[@UPV]

Hola, Leo: Muchas gracias por tu interés en nuestros cursos. En la descripción del vídeo verás la información con los enlaces a nuestros cursos MOOC. Esperamos que te sirvan. Un saludo.

[@fernandotama692]

buen video, pero también es recomendable usar gorro o cofia, tapabocas o mascarilla desechable o de tela, nosotros usamos posillos o platillos de metal autoclavables, son solo apreciaciones..!! felicitaciones por el vídeo..!!👍

[@UPV]

Respuesta del profesor Leiva: "Es cierto que para disminuir el riesgo de contaminación se puede utilizar gorro o cofia o cualquier otra máscarilla, pero también depende de la contaminación del sitio donde se haga. En un laboratorio normal no suele ser necesario según mi experiencia."

[@jacsthecat7964]

Oye entonces puedo poner estos tipos de plantas en pura agua?

[@UPV]

El profesor responde: "No es posible cultivar en agua pura porque a la planta le hacen falta nutrientes para su desarrollo que están en el medio de cultivo."

[@augustosilva33]

Somente com meio de cultura MS é possível clonar qualquer planta? Não precisa adicionar nenhum hormônios enraizador ao meio?

[@UPV]

El profesor comenta: "En este caso no es necesario. Con otras especies sí que es necesario añadir reguladores del crecimiento".

[@juanmonroy3443]

Buena tardes.. una pregunta las plantas in vitro de cultivo vegetal es autótrofos o heterótrofos?

[@UPV]

El profesor responde: "Gracias por la pregunta. El comportamiento depende de las condiciones: el tipo de recipiente, la iluminación, el medio de cultivo... Pero debido a la menor concentración de CO2 y luz en el recipiente lo normal es que sea más heterótrofo que autótrofo, ya que no se desarrolla la fotosíntesis de forma eficiente. Pero eso no implica que sea solo de un tipo de nutrición, ambas ocurrirán en mayor o menor porcentaje dependiendo de las condiciones de cultivo".

[@paaf1994]

Excelente!!!!!

[@UPV]

El profesor responde: "Me alegro que te haya sido de utilidad. Un saludo"

[@MariaCastro-wc4gz]

Me gustaría ver multiplicación de tulipanes o bulbos in vitro.

[@UPV]

El profesor comenta: "Yo no trabajo con tulipanes pero puedes buscar información en estos artículos: link.springer.com/article/10.1007%2Fs11627-014-9641-1 ".

[@ericreyes6887]

RECIÉN VI ESTE VÍDEO Y TENGO UNA CONSULTA, POR QUE NO ENFRÍA LAS PINZAS CUANDO VAN A TOCAR EL MATERIAL VEGETAL? NO SUFREN DAÑO POR TEMPERATURA DE LA PINZA RECIÉN FLAMEADA?

[@UPV]

Buen día, el profesor Miguel Leiva comenta: _Cierto. Hay que tener cuidado y evitar quemar los explantes. Conviene esperar un tiempo a que se enfrié el instrumental._ _Un saludo._ _Miguel_

[@monicavasquez3719]

Debería utilizar dos juegos de instrumentos ya el el instrumento recién flamiado le hace daño ala plata

[@БилПрихлоп-й3х]

Брависимо !

[@edreyhernandez9314]

En mi práctica con mis compañeros se quemaron xd

[@dviradv]

Y el cubrebocas?

[@UPV]

Respuesta del profesor Leiva: "Es cierto que para disminuir el riesgo de contaminación se puede utilizar gorro o cofia o cualquier otra máscarilla, pero también depende de la contaminación del sitio donde se haga. En un laboratorio normal no suele ser necesario según mi experiencia."

[@amefsu]

Buen video, me parece que la técnica de sostener la tapa del tubo de ensayo mientras se cortan los explantes es un poco exagerada; gracias por el aporte.

[@amefsu]

además de que no usó guantes ni mascarillas ni gorro, además de que el angulo de inclinación de los instrumentos mientas son flameados es peligroso porque el alcohol puede regresar hacia ud., por exeriencia propia las herramientas siempre deben apuntar hacia abajo.

[@UPV]

Buenos días Francisco, En un laboratorio normalmente no se utilizan ni mascarillas ni gorro. Si es un sitio con muchos contaminantes puede ser recomendable su uso. Lo que sí no se recomienda es el uso de guantes. Con alcohol y fuego no es una buena combinación, ya que suelen estar hechos de material inflamable y además no son estériles por lo que no aportan ninguna ventaja. Es cierto que hay que tener cuidado con el grado de inclinación de los instrumentos, pero si se hace con cuidado no es problema. Un saludo Miguel

[@susanasamudio9884]

Y la disciplina tecnológica? No usa cbreboca, ni cofia conversa mientras cultiva, no realizó una limpieza correcta de la cabina, no usa cantes, lleva su reloj puesto, etc.

[@UPV]

El profesor comenta: ""Es cierto que para disminuir el riesgo de contaminación se puede utilizar gorro o cofia o cualquier otra máscarilla, pero también depende de la contaminación del sitio donde se haga. En un laboratorio normal no suele ser necesario según mi experiencia."

[@willyadams7053]

No se lo que diga pero eso es llegar mucho a los extremos,ni en una sala de operaciones se desinfecta mas que en ese laboratorio. tanto a lso extremos no es lo ideal.

[@rubielrojas2006]

Se requiere, ya que un cultivo que se infecta no se recupera

[@miguelespinoza5132]

Parece que es muy interesante, pero solo le entiendo como el 30% de lo que dice.

[@UPV]

Buenos días Miguel, ¿podrías indicar qué es lo que no entiendes? ¿son problemas técnicos? Un saludo Miguel

[@miguelespinoza5132]

No, esta bien, es que no soy de la región, costumbre. GRACIAS.

[@miguelespinoza5132]

No son problemas técnicos, es el español de mi localidad, el regionalismo, GRACIAS por todo, este es un muy buen vídeo.

[@lavendision7346]

Makinote

[@susanasamudio9884]

Guantes

[@peceshellfishcolombia8732]

Y tus putos guantes ?