Western Blot: Conceptos Básicos

[@samuelescares4560]

Excelente vídeo, generalmente no hay buen contenido en español, tus vídeos con animaciones, buen audio y explicación clara, me ayudaron mucho. Estoy en mi primer año en un laboratorio de inmunología y me fueron muy útiles. Por favor sigue subiendo contenido así! Gracias

[@BrandonOrtizCasas]

Definitivamente estos son los detalles que me ayudan seguir con los vídeos y de mejorar su calidad. Particularmente, me gustaría subir vídeos de inmunología en un futuro cercano. ¡Mucho éxito en tu estancia! ¡Agradezco mucho tu comentario!

[@walters.7852]

@@BrandonOrtizCasas Excelente trabajo te felicito!!!

[@ikerbargas5180]

Excelente video. Estudié biología y me dedico a la ecología. No estoy familiarizado con los laboratorios, pero actualmente debo cursar algunas clases de fisiología y bioquímica a nivel posgrado y tus videos me han servido mucho. Muchas gracias.

[@BrandonOrtizCasas]

Me alegra saber que realmente pude ayudarte. ¡Mucho éxito!

[@mariavictoriatrejo24]

Excelente video y una explicación muy clara! saludos desde CORDOBA ARGENTINA

[@mariasolis735]

Super padre explicación, espero sigas ilustrándonos! me cuesta trabajo encontrara videos así en español, felicidades! :)

[@b19mr60]

Gracias por este vídeo!! Lo explicas muy bien y se entiende perfectamente. Cuando necesite ver más vídeos de este tipo sin duda buscaré en tu canal!! El audio,a mi parecer, se escucha un pelín bajo. Enhorabuena y espero ver muchOs más!! GRACIAS

[@BrandonOrtizCasas]

Los audios desde el de RT-PCR hasta atrás no son muy buenos. Pero los que siguen ya tienen una mejor calidad.

[@BrandonOrtizCasas]

En el minuto 11:10, arriba de la tercera columna de bandas. Debería decir "Células editadas con siRNA". Pequeño error de animación.

[@moisesalejo1292]

Muy buenos vídeos, se ve que les dedicas tiempo y entusiasmo, muchas gracias por ello.

[@dafnesabrinagonzalezchimal2783]

Me fue sumamente útil. ¡Qué excelente vídeo!

[@almendranena3553]

Increible, me quedó clarísimo

[@vanesa1559]

Muchas gracias por tu trabajo explicativo. Saludos!

[@rogsang9764]

Amigo, muchas gracias, este video me ha sido de mucha ayuda , es increible como pude entender todo el concepto :D

[@paulamendez1061]

Me gustó mucho tu vídeo, gracias por compartir 👏👏

[@VictorCilleros]

Buenísima explicación!!! Ilustrativa y con muchos datos y detalles. Aquí hay mucho esfuerzo y pasión por la ciencia ¡Felicidades!! 👍👍🔬 Solo un apunte, creo que cuando el secundario está unido a fluoroforo o HRP, no se necesitan rayos X (así es más seguro)

[@BrandonOrtizCasas]

¡Muchas gracias por tus amables palabras! ¡Y por dar ese valioso punto a relucir!

[@adriangomez17]

Muchas gracias maestro!! Muy buena explicación!!

[@williamenriquesanchezcolme753]

Muchas gracias, es muy útil tu video. Muy bien explicado.

[@camus2247]

gran cientifico.ojala se te ocurran hacer mas videos. vaya que en mi universidad todos de verian

[@BrandonOrtizCasas]

¡Muchas gracias! Después de mucho tiempo, por fin estoy subiendo vídeos nuevamente.

[@karlasagahon2059]

Se usan también bloqueadores para que no haya uniones inespecíficas del segundo anticuerpo.

[@henrydavidmosqueradaza3728]

Gracias por el video, por darle sueñoa pequeños cientificos

[@sofiaburgos9226]

muchas gracias por el video, es muy útil

[@danielarodriguezvargas9465]

Excelente explicación! Muchas gracias por compartir ☺️✨

[@Gerardo3491]

que buen video, me quede con ganas de saber acerca de la electroforesis

[@LuisHernandez-zz4rt]

Excelente video!!!! Felicidades!

[@miranhdz]

Buenos dias. ¿Que porcentaje de confiabilidad tiene el resultado de una Westernblot a los 43 dias de la exposición de riesgo y de haber terminado el tratamiento profilaxis post exposición?

[@porfape]

Muchas gracias

[@nahuelcesattilaluce1257]

Excelente material ! gracias

[@damianleguiza4751]

Gracias por compartir

[@shibeed222]

Muchas gracias

[@nicolasestebanaravena7883]

muy buen video !!!!, solo me quedó una duda y es que en caso de realizarse la electroforesis con SDS, los anticuerpos seguirían reconociendo a mi proteína de interés en la fase de inmunotinción ?

[@paz8390]

Muchas gracias por la explicación! pero tengo una pregunta, si el ladder no corre bien y el gel queda manchado, que se podría hacer para que el ladder corra bien y el gel cuando se tiña no se manche? :c

[@taliamarroquin4470]

mil gracias

[@Erik-ng9rp]

wow que perfecta explicación

[@theoo36]

bro acabas de salvar mi trabajo de biologia

[@ejgg100]

Buena explicación

[@kevingil1356]

Qué buen video :)

[@Dianonee]

Me encantó! Una pregunta, en qué programa hiciste tu video? :O

[@BrandonOrtizCasas]

Utilizo principalmente Photoshop e Illustrator (para las imagenes), y naturalmente, After Effects. Sin embargo, algunas animaciones sencillas las hago en PowerPoint.

[@sangoegipcia]

Te ame!!!!

[@dalilacb9635]

Excelente

[@jeremydiaz2349]

¡GRACIAS!

[@AilatanQuintanaGarcia]

me encantooo

[@adrycortes873]

Gracias

[@carlospadilla6656]

Una pregunta, cuál será la ventaja de hacer Western Blot contra la inmunoprecipitación?

[@BrandonOrtizCasas]

La inmunoprecipitación es más bien una técnica para separar, concentrar y/o purificar una proteína, ¿No? Incluso mencioné en el vídeo que puedes hacer una inmunoprecipitación previa al WB.

[@carlospadilla6656]

@@BrandonOrtizCasas Sí, claro ya entiendo el punto. No me quedaba clara la inmunoprecipitación, gracias.

[@danielamariapineroscaldero9264]

Hola, tengo una pregunta, que enfermedades se puede diagnosticar con el Western blot?

[@BrandonOrtizCasas]

Hola Daniela. Hay varias cosas para las cuales un Western Blot es bastante útil en el diagnóstico. Algunas de las más comunes para las cuales está muy estandarizada la técnica es para la detección de VIH, la Encefalopatía espongiforme bovina, entre otras.

[@azullucy5445]

Chagas

[@paulaandrade7958]

Hola, que tal? tengo una inquietud. Si utilizo western blot para evaluar un potencial interactor de una proteina, luego de la detección de bandas por quimioluminiscencia como puedo interpretar cual de las bandas obtenidas en la detección corresponde al interactor de mi proteina de interés? si una de las bandas corresponde al peso molecular de mi proteina de interés. Debo asumir que la otra banda es el interactor?

[@BrandonOrtizCasas]

Hola Paula. Intentaré contestar tu pregunta conforme la estoy entendiendo. Experimentalmente, tú sabes en que pozos insertaste tus muestras de interés. El peso molecular solo lo pones al momento de realizar la electroforesis. Hasta donde yo se, uno no suele usar anticuerpos contra lo que está en el peso molecular, por lo que este no debería aparecer en la película final (sin anticuerpo primario que los reconozca, no vendrán secundarios y no habrá luz que pasar a la película). Si en diferentes pozos pusiste diferentes muestras, tú sabes que metiste en cada parte. Y si en uno de esos lugares hay una mancha en la película, es que ahí mismo tu anticuerpo tuvo interacción con algo. (Quizá en este caso, usas un anticuerpo afín al interactor que estás buscando).

[@paulaandrade7958]

@@BrandonOrtizCasas gracias por tu respuesta. En cuanto a la proteína que estoy evaluando es CK1 en Chlamydomonas reinhardtii. Conozco el peso molecular de esta proteína (37kDa) y en la película he obtenido una marca en este peso pero también otra en la posición de 50kDa, es por esa razón que yo creo que esa sería el interactor de CK1, sin embargo no tengo seguridad sobre esto, o que otra explicación tendría la banda superior de 50kDa.

[@BrandonOrtizCasas]

Hola nuevamente Paula. Creo que ya estoy empezando a entenderte mejor. Supongo que estás realizando lo que vulgarmente llaman un Far-Western Blot. Si tu proteína de interés, solita, tiene un peso de 37 kDa y está apareciendo así en tu película; es probable que esta igual aparezca junto a un interactor, el cual sería ese "peso extra" en la banda de 50kDa (esto si hiciste una PAGE nativa ya que difícilmente quedarían juntas si desnaturalizaste completamente). Por lo que quizá en la película tienes tanto la cinasa sola como con el interactor pegado. Siendo tú, buscaría y rebuscaría la literatura por interactores de cinasa de tu especie (o parecidas) con un peso que representara esa diferencia. Si encuentras algo de 13 kDa que pueda interaccionar con ella, tendrías un candidato fuerte. O si el equipo de tu lab te lo permite, buscaría caracterizar este posible interactor con otras técnicas de proteómica. Francamente, quisiera poder ayudarte más, pero tendría que saber muchísimo del scope de tu investigación, y claro, de las metodologías y protocolos que estás siguiendo. Por que no se si estás trabajando con un lisado crudo o algo ya purificado, si estás haciendo o no coinmunoprecipitaciones, que tipo de anticuerpo usas, y un montonal de cosas más. Y también, siendo honestos, la bioquímica no es mi fuerte. Soy más del campo molecular. Pero al menos trato de ayudar hasta donde me dejan mis limitaciones.

[@paulaandrade7958]

@@BrandonOrtizCasas muchas gracias por tu importante respuesta. Me sirve para tener algo más claras mis ideas. Te agradezco y sobretodo te felicito, tus videos son muy buenos, informativos y fáciles de comprender. Saludos y por favor continúa contribuyendo a la comunicación de la ciencia.

[@vhh6080]

Mis dieses

[@sofiavargasgomez7313]

¿Cómo se puede tener acceso al paper?, me dice debo pagar o inscribirme en la pág

[@BrandonOrtizCasas]

Hola Sofia. Yo públicamente no te puedo compartir el paper. Si tienes una cuenta institucional de tu universidad o instituto de trabajo, probablemente tengan acceso al mismo. Sin embargo, aunque abiertamente no puedo recomendarlo, siempre está la opción de "scihuberar" el paper, lo cual no cuesta nada, es fácil y rápido (aunque en esencia, no es lícito)

[@sofiavargasgomez7313]

@@BrandonOrtizCasas Entiendo, gracias! Genial el video

[@nadieliz1642]

que embole que es este procedimientoo. por dios que padecimiento!

[@damiandeza2761]

En audio estéreo se escucha horrible, solo de un lado

[@BrandonOrtizCasas]

No había visto ese detalle cuando se escucha con audífonos. Gracias por avisar. Veré que puedo hacer.

[@damiandeza2761]

@@BrandonOrtizCasas Más allá de eso, se entiende todo de 10! Gracias!

[@Chromaty85]

Nada

[@franciscobahamonde234]

Muchas gracias, pero no entendi nada jajaja

[@BrandonOrtizCasas]

:(

[@drsratasupremos4103]

amigo actualiza tu paper, es de 1980 wtf

[@BrandonOrtizCasas]

Preferí poner el paper original. Lo demás ya lo podrán scihubear a su tiempo.

[@moisesalejo1292]

El papel original siempre es bueno, es el que citarán todos los demás .